El descubrimiento de nuevas moléculas como los péptidos antimicrobianos es fundamental para combatir al usos excesivo de antibioticos. Estas biomoléculas poseen ciertas características fisicoquímicas comunes que se relacionan directamente con su mecanismo de acción que se basa en un contacto electrostático. Una de las fuentes más abundantes y estudiadas con alrededor de 1078 AMPs identificados hasta el año 2019 es la secreción cutánea de los anfibios. Una de las especies estudiadas es Cruziohyla calcarifer que forma parte de la familia Phyllomedusidae de la que se logró identificar 16 péptidos antimicrobianos llamados cruzioseptinas, los cuales presentaron una alta actividad antimicrobiana contra gram positivas y negativas (CZS). El objetivo de este trabajo de investigación es caracterizar las propiedades antimicrobianas y hemolíticas de dos cruzioseptinas (CZS-8 y CZS-13) de la secreción cutánea de la rana espléndida Cruziohyla calcarifer y analizar su mecanismo de interacción con la célula bacteriana. La purificación de cada uno de los péptidos se realizó por medio del uso de cromatografía de alta eficiencia (HPLC) y espectrometría de masas (MALDI-TOF), con el fin de obtener una pureza > 80 %. La bioactividad de cada péptido se evaluó por medio del ensayo (MIC) para la determinación de la concentración mínima inhibitoria contra microorganismos como Escherichia Coli, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae y Candida albicans. Por último se analizó el %hemólisis de cada péptido con el fin de evaluar su potencial terapéutico. Se purificó en total 10.2 mg de cruzioseptina-8 con una pureza del 85% y de cruzioseptina-13 se obtuvo 18.2 mg con una pureza del 92%. El péptido cruzioseptina-8 presentó una actividad significativa contra E. Coli, S. Aureus y K. Pneumoniae y un bajo porcentaje de hemólisis, por otro lado el péptido cruzioseptina-13 no presentó actividad contra ningún microorganismo antes mencionado y un alto porcentaje hemolítico.