El incremento preocupante de la resistencia a los antibióticos está impulsando la investigación hacia la exploración de alternativas terapéuticas. Una de las opciones en auge son los péptidos bioactivos presentes en la secreción cutánea de anfibios. El presente trabajo de investigación se centró en identificar la composición peptídica de la secreción cutánea de la rana mono de líneas blancas Phyllomedusa vaillantii. El aislamiento y la identificación de los péptidos bioactivos de su secreción cutánea se realizaron mediante clonaje molecular y bioinformática. El ARNm se aisló de la secreción cutánea y se utilizó para establecer una biblioteca de ADNc mediante la transcripción del ARNm. El ADNc de interés se amplificó mediante clonaje molecular y se secuenció por el método de Sanger para obtener la estructura prepropeptídica. Por ende, las secuencias que codificaban a prepropéptidos fueron sujetos a una búsqueda NCBI-BLAST y a una alineación de secuencias en MEGAX para verificar las coincidencias con otras secuencias reportadas. De modo que, se caracterizó la estructura primaria de doce secuencias prepropeptídicas. Entre ellos se encontraron tres filoquininas y una filoseptina que se informaron previamente en otras especies. Las otras ocho secuencias de péptidos eran nuevas, incluida una variante de medusina, cinco dermaseptinas, un péptido rico en tirosina y un péptido huérfano. Además, se predijo la actividad antimicrobiana mediante sus propiedades físico-químicas, en el cual las nuevas dermaseptinas, 1 al 5, presentaron una actividad antimicrobiana significativa. En este estudio se evidencia la gran diversidad de péptidos bioactivos que presentan las secreciones cutáneas y a su vez, se resalta la importancia de abarcar la farmacología de los péptidos y su función biológica en anuros.