La resistencia antimicrobiana es una amenaza para la salud global, causando más de 700,000 muertes anuales. En este contexto, los péptidos antimicrobianos, como las dermaseptinas presentes en la piel de anfibios, se perfilan como alternativas prometedoras frente a los antibióticos convencionales por su eficacia y baja citotoxicidad. Esta investigación evaluó la actividad antimicrobiana y hemolítica de las dermaseptinas DRS-SP6 y DRS-SP7, péptidos sintéticos de Agalychnis spurrelli. Las secuencias fueron sintetizadas por síntesis química en fase sólida, purificadas por cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa y caracterizadas por espectrometría de masas. Posteriormente, se determinó la concentración inhibitoria mínima (CIM) frente a cepas bacterianas de referencia (Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida albicans y Enterococcus faecalis) y cepas resistentes a antibióticos (Salmonella infantis y Klebsiella pneumoniae productora de carbapenemasas), además de un ensayo hemolítico con eritrocitos humanos. Finalmente, se realizaron análisis bioinformáticos y espectroscopía de dicroísmo circular para predecir propiedades fisicoquímicas y estructura secundaria. DRS-SP7 exhibió una potente actividad antimicrobiana a concentraciones de 2,63 a 42,11 µM, frente a bacterias Gram-negativas, Gram-positivas y levaduras, mostrando alta selectividad frente a E. coli y S. infantis resistente (índice de selectividad = 16). En cambio, DRS-SP6 presentó una actividad limitada, con inhibición únicamente a concentraciones elevadas de 41,89 µM frente a S. aureus (índice de selectividad = 4). Ambos péptidos demostraron baja actividad hemolítica a concentraciones efectivas y la espectroscopía de dicroísmo circular confirmó que presentan estructura alfa hélice, más marcada en DRS-SP7. En conclusión, DRS-SP7 se perfila como un agente antimicrobiano promisorio contra bacterias resistentes, mientras que DRS-SP6 podría optimizarse estructuralmente para mejorar su eficacia sin comprometer la seguridad. Estos hallazgos refuerzan el potencial de las dermaseptinas en el desarrollo de nuevas estrategias biotecnológicas frente a la resistencia antimicrobiana.